基因擴增儀的基本要素分析
更新時間:2022-11-25 點擊次數(shù):1310次
基因擴增儀是一款多功能、多用途的PCR儀,可滿足不同PCR反應(yīng)管、不同孔數(shù)及不同類型PCR實驗要求。優(yōu)異的升降溫速度、溫度控制保證了實驗快速、準確,超大屏幕顯示和人性化的操作界面使操作更簡單易懂。
基因擴增儀的基本要素與DNA復(fù)制的基本要素是一致的:
1、DNA模板:待拷貝的DNA稱為模板,它可以是雙鏈DNA也可是單鏈DNA,擴增得到的產(chǎn)物是雙鏈狀態(tài)的。
2、引物:是DNA復(fù)制的先鋒,就象結(jié)晶過程中的晶核,引導(dǎo)DNA的合成。在PCR擴增中一般使用合成的寡核苷酸作引物。
3、DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶):是DNA復(fù)制的動力,在dNTP等底物存在時在引物的引導(dǎo)下沿著模板DNA合成互補的DNA鏈。
4、緩沖液:提供DNA合成反應(yīng)所需的pH,離子強度等環(huán)境。
5、4種單核苷酸:dNTP,提供DNA合成原料。
它可以在試管里建立反應(yīng),經(jīng)過數(shù)小時之后,就能將極微量的目的基因或者某一特定的DNA段擴增數(shù)十萬倍,乃至千百萬倍,而無需通過繁瑣費時的基因克隆程序,便可獲得足夠數(shù)量的精確的DNA拷貝,所以有人亦稱之為無細胞的分子克隆法。
PCR反應(yīng)一般設(shè)置20~40次循環(huán),每一循環(huán)包括高溫變性、低溫退火、中溫延伸三步反應(yīng)。每一循環(huán)的產(chǎn)物作為下一個循環(huán)的模板。PCR的擴增效率很高,如果循環(huán)次數(shù)是30次,那么新生DNA段理論上達到230拷貝(約為109個分子)。擴增時加入的引物利用熒光素進行標記,使引物和熒光探針同時與模板進行特異性結(jié)合,擴增結(jié)果通過熒光信號采集系統(tǒng)實時采集信號并輸送到計算機分析處理系統(tǒng),實時輸出量化結(jié)果。