基因擴增儀被廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)領(lǐng)域，它可以把DNA序列進行擴增，讓科學(xué)家更方便地從樣本中提取出特定的DNA片段。本文將為你介紹基因擴增儀的使用方法，幫助你更好地掌握這一實驗技術(shù)。

 

　　1.準備工作

 

　　在使用之前，需要先準備好耗材和實驗器材。首先，檢查PCR試劑盒是否完好無損、是否過期。其次，檢查隨機引物（primers）是否正確、完整。同樣重要的是，準備好自己需要擴增的DNA模板，保證模板的質(zhì)量和純度。

 

　　2.裝載PCR反應(yīng)體系

 

　　裁切好所需長度的特定引物后，需要將引物與PCR試劑盒配制成反應(yīng)液。按照試劑盒說明書的指導(dǎo)，在離心管中混合PCR混合液。通常情況下，一支PCR反應(yīng)混合液可擴增20ulPCR反應(yīng)液。

 

　　3.安裝PCR管到該儀器

 

　　將裝有PCR反應(yīng)體系的管放入孔位。根據(jù)PCR引物的交聯(lián)溫度，設(shè)置好反應(yīng)程序的溫度體系。設(shè)定好反應(yīng)程序后，按照儀器的說明書啟動擴增程序。

 

　　4.擴增反應(yīng)

 

　　通過基因擴增儀可控制反應(yīng)的時間和溫度，通常PCR反應(yīng)具有3個階段：變性、退火和延伸階段。

 

　?。?）變性：將DNA兩股分離為單股。

 

　?。?）退火：引物結(jié)合到模板上并結(jié)束。

 

　?。?）延伸：在DNA聚合酶作用下延長引物序列并產(chǎn)生新的DNA片段。

 

　　通常情況下，反應(yīng)溫度體系如下所示：

 

　　1）變性：95℃，30秒。

 

　　2）退火：恰當引物Tm-5℃~10℃。

 

　　3）延伸：72℃，30秒/每kbp。

 

　　4）重復(fù)擴增若干次，一般為20-30次。

 

　　5.離心與收集產(chǎn)物

 

　　反應(yīng)液往往是渾濁的，需要離心以便去除沉淀。我們可以用凝膠電泳等方法檢測擴增結(jié)果，并對針對性更強的目的進行后續(xù)的實驗操作。

 

　　以上就是使用基因擴增儀的步驟，希望這些內(nèi)容能幫助您更好地完成實驗任務(wù)。當然，在實踐過程中還可能會遇到各種問題，需要耐心解決。